免疫印迹法（IBT）从分子水平检测ENA多肽抗体的临床意义

罗夏  杨东生  吕新翔  郭志勇 2005-12-13 13:07:26 中华中西医杂志 2003年8月第4卷第15期

 【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106（2003）15-2361-01

ENA试剂盒采用国际先进的生物技术-免疫印迹技术（Immunoblotting），将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原（DNA）经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维素膜上，可一次检测8～10种自身抗体，用于系统性红斑狼疮（SLE）、混合性结缔组织病（MCTD）、硬皮病（PSS）、干燥综合征（SS）、多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）及类风湿性关节炎（PA）等六种不同风湿病的诊断和鉴别诊断。与传统方法比较具有敏感性高、特异性强、操作简便快速等优点，适合于各大医院推广应用。

1 材料与方法

1.1 ENA抗原 由恒佳生物工程公司提供。

1.2 受检血清 SLE128例，MCTD17例，SS18例，PSS11例，PM32例，RA35例，共计241例，非结缔组织病包括药 疹、接触性皮炎、多形性红斑、银屑病、多发性斑秃、扁平苔藓等60例，30例健康血清来源于本院血库。

1.3 实验方法 印迹:即转移电泳，由恒佳生物工程公司提供之转移印迹好的硝酸纤维薄膜。酶联免疫:洗涤液用含0.3%Tween-20的pH8.3、0.3mmol/LTris-HCl缓冲液，血清10μl，底物用OPD先将转移电泳好的硝酸纤维薄膜与血清37℃反应40min，再用Tween-20洗涤液洗3次，每次1min，再加辣根过氧化酶标记的抗人IgG抗体37℃反应40min，同上洗涤，加底物反应10min，以流水冲洗中止反应，观察硝酸纤维膜上ENA显色的多肽带分子量。

2 结果见表1。

表1 各组ENA多肽检测的阳性结果 （n，%）

3 讨论