无血清培养基对体外激活的A-NK细胞的支持作用（基金项目）

王志华 张彦 张春艳 2005-12-13 13:08:40 中华中西医杂志 2004年5月第5卷第10期

 基金项目:本课题受国家“九五”重点攻关课题（96-960A-01-20）和黑龙江省重点攻关课题（G00C190401）资助

【摘要】 目的 研究多方面比较无血清培养基AIMV与完全培养基对体外细胞因子激活的NK细胞的支持作用。方法 分别用AIMV及完全培养基培养粘附NK细胞（A-NK）和非粘附NK细胞（NA-NK），比较细胞的增殖能力、杀伤肿瘤细胞的能力、表达粘附分子CD11 c 的能力，并通过电镜对A-NK细胞所杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察。结果 与完全培养基培养细胞相比，AIMV培养细胞增殖能力、杀伤肿瘤细胞的能力、表达CD11 c 的能力与之相当;在同一培养条件下A-NK细胞的增殖能力、杀伤活性及表达CD11 c 的能力明显强于NA-NK细胞;被A-NK细胞杀伤的肿瘤细胞死亡形式是溶解坏死和凋亡。结论 无血清培养基可替代完全培养基用于A-NK细胞的培养;A-NK细胞用于治疗肿瘤的过继免疫疗法要优于NA-NK细胞。

关键词 粘附NK细胞 无血清培养基 细胞培养 四甲基偶氮唑盐比色法

The culturing of IL-2-activated natural killer cells were

suported with serum-free medium AIMV in vitro

Wang Zhihua，Zhang Yan，Zhang Chunyan

Cancer Research Institute，Harbin Medical University，Harbin150040.

Key words adherent natural killer cell serum-free medium cell culture MTT-assay

1 材料与方法

1.2 人外周血单个核细胞的制备 淋巴细胞分离液常规分离健康人的外周血单个核细胞，充分洗涤后，置于塑料离心管中用PME（5mmol/L）室温处理40min后充分洗涤备用。

1.6 细胞表型分析 细胞诱导3～5h后，分别收集完全培养基和AIMV培养的A-NK细胞和NA-NK细胞，按5×10 ⁵ 个细胞/管，用美国Becton-Dickinson公司的流式细胞 仪检测并分析CD11 c 的表达。